(一)其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒直接法
    (1)石蠟切片脫蠟至水，冰凍切片或細(xì)胞涂片經(jīng)丙酮固定10min，PBS洗3min×2次。
    (2)滴加0．3％Hz02甲醇液，室溫處理20min，PBS洗3min× 3次(抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性)。
    (3)0。l％*37~C消化20min或AR(只限于石蠟片)，PBS洗3min×3次。
    (4)滴加1：(5～20)正常羊血清或牛血清20min(室溫或37℃)，吸去多余血清，不洗。
    (5)適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)記特異性抗體(一抗)孵育60min 37℃，PBS洗3min×3次。
    (6)0．04％DAB+0．03％Hz02顯色8—12rain，在光鏡下控制。
    (7）充分水洗，蘇木精復(fù)染，鹽酸乙醇分化15～30s。
    (8)常規(guī)樹膠封片，結(jié)果觀察。
 
    (二)間接法
    (1)～(3)同直接法。
    (4)第二抗體的正常動(dòng)物血清1：20，室溫20min(阻斷非特異性結(jié)合位點(diǎn))，傾去多余血清，不洗。
    (5)其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒適當(dāng)稀釋的特異性抗體(一抗)濕盒37℃中孵育60min，或室溫孵育4h，或4℃孵育過夜，PBS洗3min×3次。
    (6)酶標(biāo)記抗體(二抗)37℃孵育40min，PBS洗3rain×3次
    (7)DAB／Hz02顯色8～12rain，鏡下控制。
    (8)以下同直接法。
 
    (三)三步酶標(biāo)間接法
    三步酶標(biāo)間接法是在酶標(biāo)間接法的基礎(chǔ)上再加一步酶標(biāo)記三抗，信號(hào)進(jìn)一步放大，使敏感性進(jìn)一步增加。第三步酶標(biāo)記三抗必須是抗第二步酶標(biāo)記二抗，例如第三步酶標(biāo)記二抗是兔抗鼠，第三步酶標(biāo)記三抗應(yīng)該是羊抗兔酶標(biāo)抗體。另外，第二步和第三步酶標(biāo)抗體所用的酶必須是同一種酶。
 
    (四)酶標(biāo)記抗原法
該方法僅用一種特異性抗體，抗體必須過量。其原理是抗體中二個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(二價(jià))分別與組織細(xì)胞內(nèi)的抗原和酶標(biāo)記抗原結(jié)合。其它elisa免疫檢測(cè)試劑盒該法的Z大的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)抗體的特異性和純度要求不高，可以非常穩(wěn)定地進(jìn)行IHC的雙重標(biāo)記，標(biāo)記二種抗原。