2 操作方法

2.1水樣品檢測(cè)

2.1.1水樣過濾：將滅菌的過濾裝置連接到抽濾瓶上，用滅菌鑷子夾取直徑47 mm～50 mm，孔徑為0.45μm的滅菌濾膜，放在濾器底部，旋緊蓋子，將250mL水樣注入濾器中抽濾。

2.1.2 揭開檢測(cè)板上層膜，在檢測(cè)板紙片上加1 mL無(wú)菌水濕潤(rùn)后，迅速用無(wú)菌鑷子將過濾水樣的濾膜移放在檢測(cè)板紙片上（濾膜截留細(xì)菌面向上），濾膜與紙片之間不要夾留著氣泡，貼好上層膜。

2.2食品樣品檢測(cè)

2.2.1 取25 g（或25 mL）樣品放入裝有225 mL生理鹽水的均質(zhì)袋中，以8000 r/min均質(zhì)1～2 min，制成1:10樣品均液，根據(jù)樣品污染程度及檢驗(yàn)需要，可進(jìn)一步制成10倍遞增的樣品稀釋液。

2.2.2將糞鏈球菌檢測(cè)板上層膜不干膠標(biāo)簽部分揭開，用無(wú)菌吸管吸取1 mL樣品稀釋液均勻滴加到紙片上，迅速貼好上層膜并水平晃動(dòng)檢測(cè)板，靜置10 s左右，待樣品稀釋液*被吸附在濾紙上。每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)檢測(cè)板作為重復(fù)。

2.3培養(yǎng)：將檢測(cè)板疊在一起，倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，36℃±1℃，培養(yǎng)15～24 h。

3 結(jié)果判讀

在檢測(cè)板（濾膜）上生長(zhǎng)的紅色帶黃暈的斑點(diǎn)即為糞鏈球菌陽(yáng)性，若紙片上的紅色斑點(diǎn)無(wú)黃暈則為糞鏈球菌陰性。

4 計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式

4.1 濾膜過濾水樣：以濾過一張無(wú)菌濾膜后產(chǎn)生的菌落數(shù)計(jì)算，選擇菌落數(shù)在20～100CFU的檢測(cè)板進(jìn)行計(jì)數(shù)后即為250mL水樣品中含的菌落數(shù)。結(jié)果以CFU/250 mL為單位報(bào)告。

4.2食品樣品計(jì)數(shù)

4.2.1以生長(zhǎng)有30～300CFU的檢測(cè)板為計(jì)數(shù)適宜范圍。

4.2.2若只有一個(gè)稀釋度檢測(cè)板上的菌落數(shù)在計(jì)數(shù)合適范圍30～300CFU之間，則計(jì)算兩個(gè)檢測(cè)板菌落數(shù)的平均值，再除以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，作為每克（毫升）中菌落數(shù)結(jié)果。

4.2.3若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按式（1）計(jì)算：

∑C

N=———————— ???????????????????（1）

（n1+0.1n2）d

式中：

N——樣品中糞鏈球菌菌落數(shù)；

∑C——兩個(gè)連續(xù)稀釋度檢測(cè)板（含適宜范圍菌落數(shù)的檢測(cè)板）糞鏈球菌菌落之和；

n1——適宜范圍菌落數(shù)的個(gè)稀釋度（低）檢測(cè)板個(gè)數(shù)

n2——適宜范圍菌落數(shù)的第二個(gè)稀釋度（高）檢測(cè)板個(gè)數(shù)

d——稀釋度的稀釋倍數(shù)

示例：

（245+247+31+30）

N=——————————=2514

（2+0.1×2）×10-1

結(jié)果表述為2.5×103CFU/g(ml)。

4.2.4若有稀釋度檢測(cè)板上均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1/d（d—低稀釋倍數(shù)）計(jì)算。

4.2.5低數(shù)值的估算：如果實(shí)驗(yàn)樣品原液（水及液體飲料）或初始稀釋懸液（其他樣品）的兩個(gè)檢測(cè)板上的菌落數(shù)均小于30CFU，計(jì)算兩個(gè)檢測(cè)板上的菌落數(shù)的平均數(shù)。計(jì)算式（2）：

∑C

NE =—— ???????????????????（2）

nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值；

∑C——兩個(gè)檢測(cè)板上菌落數(shù)的和；

n——檢測(cè)板的數(shù)量；

d——樣品初始懸液或?qū)嶋H接種懸液的稀釋倍數(shù)。

4.2.6大數(shù)值的估算：若有稀釋度的檢測(cè)板上菌落數(shù)均大于300CFU，計(jì)數(shù)接近300CFU的檢測(cè)板上的菌落并計(jì)算出平均數(shù)，其他檢測(cè)板可記錄為多不可計(jì)。結(jié)果計(jì)算式（3）：

∑C

NE =—— ???????????????????（3）

nd

式中：

NE——每毫升或每克樣品中菌數(shù)的估算值；

∑C——兩個(gè)檢測(cè)板上菌落數(shù)之和；

n——檢測(cè)板的數(shù)量；

d——與樣品懸液相一致的稀釋倍數(shù)。

5結(jié)果報(bào)告

固體樣品以CFU/g為單位報(bào)告，液體樣品以CFU/mL為單位報(bào)告。

6附加說明

注意使用過的檢測(cè)板上帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

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