泰樂(lè)菌素ELISA檢測(cè)試劑盒

（貨號(hào)：Ounuo99007）

【原理】

   泰樂(lè)菌素ELISA檢測(cè)試劑盒，本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物泰樂(lè)菌素與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)其抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含泰樂(lè)菌素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出殘留物泰樂(lè)菌素的含量。

【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】  

規(guī)      格：96孔/盒

靈 敏 度： 0.1ppb

檢測(cè)時(shí)間： 45min

樣本檢測(cè)下限：

組織………………………………0.6ppb

蜂蜜 ……………………………0.3ppb

血清………………………………6ppb

牛奶………………………………6ppb

樣本回收率

組織……………………………85±10%

蜂蜜……………………………85±15%

交叉反應(yīng)率：

泰樂(lè)菌素 ………………………  99.9%

與其他大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物交叉反應(yīng)小于1%

試 劑 盒 組 成

1、微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔）

2、標(biāo) 準(zhǔn) 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、 0.1ppb、

     0.3ppb、0.9ppb、 2.7ppb、8.1ppb

3、高濃度標(biāo)準(zhǔn)品×1瓶：（1ml/瓶）100ppb

4、酶標(biāo)記物     7ml  ……………………………   紅色帽

5、抗體工作液 7ml ……………………………… 綠色帽

6、底物A液    7ml ………………………………棕色帽

7、底物B液　7 ml………………………………黑色帽

8、終止液        7 ml ………………………………黃色帽

9、2X濃縮復(fù)溶液 50 ml…………………………藍(lán)色帽

10、20X濃縮洗滌液40 ml……………………… 白色帽

11、使用說(shuō)明書(shū)………………… …………………1份

【所用儀器、試劑】  

（1）設(shè)備：

微孔板酶標(biāo)儀(450nm)、振蕩器、離心機(jī)、微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl 、容量瓶：100ml，500ml，1000ml

（2）試劑

甲醇、濃HCl、乙腈

【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】

配液1：0.1M NaOH :

               0.4g NaOH 加去離子水100ml溶解

配液2：0.1M HCl

取0.9ml濃HCl加去離子水定容至100ml。

配液3：樣本提取液（乙腈-0.1M HCl）—甲醇溶液:

               將乙腈84ml+0.1M HCl 16ml混合，再加入

               18ml甲醇混合。

配液4：復(fù)溶工作液

               2X復(fù)溶液在使用前請(qǐng)按1：1稀釋

            （1份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）

配液5：洗滌液

              將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用蒸餾水稀釋

             20×濃縮洗滌液在使用前請(qǐng)按1：19稀釋?zhuān)?/span>1份    

             濃縮洗滌液+19份去離子水）（可按需配置）

【樣本前處理步驟】  

樣本前處理須知

處理任何樣本時(shí)，都必須注意：

（a）本試劑盒所檢測(cè)的組織樣本包括：動(dòng)物組織、禽類(lèi)和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚(yú)、蝦等。

（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。

（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  樣本前處理方法

（A）肌肉、肝臟樣本 （樣本稀釋倍數(shù)2）

1、   用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；

2、   稱(chēng)取2±0.05g樣本于50ml離心管中，加入8ml樣本提取液，用振蕩器振蕩5分鐘；4000轉(zhuǎn)/分以上,室溫離心10分鐘；

3、   取上清液2ml，加入0.1M NaOH溶液1ml,混合后加入 3ml  萃取，振蕩器上振蕩5分鐘；

4、   4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫離心10分鐘。去除上層相，取下層全部有機(jī)相至干凈玻璃試管中，于56℃水浴下氮?dú)?/span>/空氣吹干；

5、   用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥后的殘留物，混合30s；

6、   取50ul用于分析。

（B）蜂蜜樣本（樣本稀釋倍數(shù)1）

1、     稱(chēng)取1±0.05g樣本于50ml離心管中，加2ml去離子水渦動(dòng)2分鐘使其溶解，再加入10ml 上下振蕩5分鐘

2、     4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫離心10分鐘。去除上層相，取下層全部有機(jī)相至干凈玻璃試管中，于56℃水浴下氮?dú)?/span>/空氣吹干；用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥后的殘留物，混合30s；

3、     取50ul用于分析。

（C） 血清樣本   (樣本稀釋倍數(shù)：20倍)

1、將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心

      10min，分離出血清或過(guò)濾血清；

2、取50µl血清，加入950µl稀釋后的復(fù)溶液混合，混合30s；

3、取50µl液體用于分析。

（b）牛奶

1、取1ml牛奶樣本于離心管中，在3000r/min，4℃離心10min，

      去除上層脂肪。

2、取50ul上清液，加入950ul 稀釋后的復(fù)溶液混勻，混合30s。

3、取50µl液體用于分析。

     樣本稀釋倍數(shù)：20倍

【酶標(biāo)免疫分析程序】  

操作步驟：

1、   將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

1、   編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

2、   加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /孔，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境避光反應(yīng)30分鐘。

3、   洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加洗滌液 250µl/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗滌4－5次，用吸水紙拍干。

4、   顯色：每孔先各加入底物液A 50μl，再各加入底物液B 50μl，輕輕晃蕩混勻，并在25℃下避光反應(yīng)15分鐘。

5、   讀數(shù)：每孔各加50μl終止液，在酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定OD值（建議用450/630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)，在5分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）。

【結(jié)果判定】  

定量分析

（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以99.9%，即：

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B₀—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以泰樂(lè)菌素濃度（ng /ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中泰樂(lè)菌素實(shí)際含量。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?/span>

【注意事項(xiàng)】  

1、   使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、   在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、   混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、   反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

5、   不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、   不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。

7、   顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A_450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

8、   該試劑盒反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

【儲(chǔ)存】

原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。

【有效期】

有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。