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分析人源細(xì)胞的結(jié)構(gòu)2017/06/27: 人源細(xì)胞通常很小，需用顯微鏡才能見到，但也有肉眼可見的大型卵細(xì)胞。細(xì)胞的形狀因其生長(zhǎng)、分化和功能的不同而有很大變化，有卵圓形、柱形、鱗形、梭形、樹枝形等。真核細(xì)胞的構(gòu)造主要可分為細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜三部分。細(xì)胞膜之內(nèi)的生活物質(zhì)包括細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)統(tǒng)稱為原生質(zhì)?；罴?xì)胞的化學(xué)組成主要是水，約占90%，其余為蛋白質(zhì)、核酸、脂類、糖類以及少量無機(jī)物質(zhì)。在細(xì)胞質(zhì)中有一些稱為細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)，如線粒體、溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。細(xì)胞膜內(nèi)有兩種主要成分：細(xì)胞漿和細(xì)胞核。細(xì)胞漿中含有一些消耗和轉(zhuǎn)換能量的結(jié)構(gòu)，以及

人源細(xì)胞的培養(yǎng)液2017/06/22: 現(xiàn)代生物技術(shù)均通過人源細(xì)胞作為載體來進(jìn)行，無論是基因治療、干細(xì)胞、克隆技術(shù)都在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的。細(xì)胞的生長(zhǎng)需要一定的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，用于維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基，即指所有用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存細(xì)胞用的物質(zhì)，就其本意上講為人工模擬體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長(zhǎng)和繁殖的能力。它是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)胞培養(yǎng)基其組成成分主要有：水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子及其他一些入核酸降解物、激素等。隨著動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)的迅速發(fā)展，作為細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域中zui基本

如何消除組織培養(yǎng)的污染2017/06/20: 人源細(xì)胞當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟。1)在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。2)分散人源細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)

保存ATCC細(xì)胞的復(fù)蘇方法2017/06/15: 1.ATCC細(xì)胞快速解凍凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）。2.解凍后的細(xì)胞可直接接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24小時(shí)后再用新鮮*培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。3.如果細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中ATCC細(xì)胞。AJ6987[CBS669.85,FERM-P3696]Myceliophthorathermophila(Apinis)v

人源細(xì)胞的保存方法2017/06/13: 1．人源細(xì)胞材料（1）細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。（2）10％二甲基亞砜保護(hù)液（二甲基亞砜能損壞濾器，而又被高壓所破壞，所以不能過濾或高壓消毒。其本身就是，無菌）：含10％二甲基亞砜、20％滅活胎牛血清，70％RPMI—1640液。（3）20％FCS—1640培養(yǎng)液：含*100U/ml，*100μg/ml。（4）滅菌的2ml安瓶等2．操作方法（1）去掉細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液，加入10％FCS—1640液，使細(xì)胞懸浮。（3）1000r/min離心10min，去上清。細(xì)胞沉淀用10％二甲基亞砜保護(hù)液

干細(xì)胞解凍培養(yǎng)技巧分析2017/06/08: 說明1.經(jīng)過冷凍保存后的干細(xì)胞，其生存率會(huì)下降，冷凍時(shí)之冷卻速度，保存溫度，解凍時(shí)升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細(xì)胞存活率。2.一般而言，４℃以下慢慢地冷凍，保存于液態(tài)氮中（-196℃）。3.37℃快速解凍。4.保護(hù)劑（抗凍劑）：添加甘油（glycerol）（I0%左右）或dimethy1sulfoxide（DMSO）（5-10%）。5.有些細(xì)胞如果采用上述的方法時(shí)，無法得到高的存活率。此時(shí)，則必需考慮可能傷害細(xì)胞的機(jī)制，添加劑之作用等而來找出適當(dāng)?shù)臈l件來修正。材料:1

人源細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的一些特殊設(shè)備2017/06/06: 人源細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室除了應(yīng)配備上述的常用基本設(shè)備以外，如有條件，可添置一些特殊或*的設(shè)備儀器，以便更有效、更、更深入地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室工作。例如：(1)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀——可用于進(jìn)行免疫學(xué)測(cè)定及細(xì)胞毒性、藥物敏感性檢測(cè)等。(2)超低溫冰箱(-85℃)——便于儲(chǔ)存某些試劑及標(biāo)本。(3)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)器——用于某些特殊細(xì)胞或需要收獲大量細(xì)胞的培養(yǎng)。(4)熒光顯微鏡——進(jìn)行熒光染色樣本的觀察。(5)流式細(xì)胞儀——可更及快速檢測(cè)細(xì)胞。(6)用于檢測(cè)人源細(xì)胞培養(yǎng)條件的各種儀器，例如專門為快速分析細(xì)胞培養(yǎng)基中主要或關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)

人源細(xì)胞出現(xiàn)問題不予以重發(fā)的情況有哪些？2017/06/01: 人源細(xì)胞出現(xiàn)問題不予以重發(fā)的情況有哪些？（1）客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；（2）客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；（3）非推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；（4）細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；（5）細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；（6）細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；（7）視具體情況而定。F9(小鼠畸胎瘤細(xì)胞)人源細(xì)胞5×106cells/瓶×2FaDu(人咽鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2GBC-SD

腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)方法2017/05/25: 腫瘤細(xì)胞是血液、淋巴和所有哺乳動(dòng)物組織類型中所見的吞噬細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞是造血系統(tǒng)中可塑性zui強(qiáng)的一種細(xì)胞，所有組織中都有這種細(xì)胞，并且其也具有*的功能多樣性。它們?cè)谡０l(fā)育、體內(nèi)平衡、組織修復(fù)和對(duì)病原體的免疫反應(yīng)中起很多不同作用。它們的多樣性意味著，幾乎每一種人類疾病都涉及它們，它們也是主要治療目標(biāo)，因?yàn)樗鼈兊墓δ芸梢员患訌?qiáng)或抑制，以改變疾病的結(jié)果。這個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)快，條件好時(shí)24h內(nèi)能分裂兩次至少。而且喜歡扎堆，所以2天就要傳代，不是真的空間不夠，而是細(xì)胞都擠在一起。所以，如果瓶子里細(xì)胞密度小，培

Caspase-3活性的檢測(cè)技術(shù)分析2017/05/23: Caspase家族在介導(dǎo)人源細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，它在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基(17KD)和兩個(gè)小亞基(12KD)組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，zui終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。但在細(xì)胞凋亡的晚期和死亡細(xì)胞，caspase-3的活性明顯下降。1Westernblot分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspas

培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢原因分析2017/05/18: 培養(yǎng)人源細(xì)胞生長(zhǎng)減慢可能原因（1）由于更換不同培養(yǎng)液或血清（2）培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如*或生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏或已被破壞。（3）培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染（4）試劑保存不當(dāng)（5）接種細(xì)胞起始濃度太低（6）細(xì)胞已老化（7）支原體污染建議解決方法（1）比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)。讓人源細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。（2）換入新鮮配制培養(yǎng)液，或補(bǔ)加*及生長(zhǎng)因子。（3）用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物?；蛴每股爻?。（4）血清需保存在-5℃到-20℃。培

分析干細(xì)胞周期的操作步驟2017/05/16: Ⅰ、干細(xì)胞樣品準(zhǔn)備準(zhǔn)備以下一種或幾種樣品A、組織單細(xì)胞懸浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盤細(xì)胞)B、組織培養(yǎng)細(xì)胞C、Ficoll-hypaque分離的單核細(xì)胞Ⅱ、干細(xì)胞反應(yīng)體系-DNA低滲緩沖液檸檬酸三鈉0.25gTriton-X1000.75mlPropidiumiodide0.025g核糖核酸酶0.005g蒸餾水250ml我們將該DNA低滲溶液于密閉瓶子中存放數(shù)月后并無發(fā)現(xiàn)有任何染色活性的丟失Ⅲ、染色1、每一個(gè)管子中放入1×106個(gè)細(xì)胞;2、樣品離心后盡可能*地移去上清液，并且不要打碎沉淀塊;3

ATCC細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法2017/05/09: 一、原理培養(yǎng)的ATCC細(xì)胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長(zhǎng)良好，所以要進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)結(jié)果以每毫升細(xì)胞數(shù)表示。細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理和方法與血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同。在細(xì)胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細(xì)胞，總細(xì)胞中活細(xì)胞所占的百分比叫做細(xì)胞活力，由組織中分離細(xì)胞一般也要檢查活力，以了解分離的過程對(duì)細(xì)胞是否有損傷作用。復(fù)蘇后的細(xì)胞也要檢查活力，了解凍存和復(fù)蘇的效果。?（一）細(xì)胞計(jì)數(shù)1、將血球計(jì)數(shù)板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。2、將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。3

配制可高壓滅菌粉末細(xì)胞培養(yǎng)基操作方法2017/05/04: 1)ATCC細(xì)胞其配制用水及配制粉劑的稱取、及配制程序基本同過濾型培養(yǎng)基配制方法。溶解后高壓，通常在121℃、15psi下滅菌15分鐘。2)待細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至室溫，按一定比例加入無菌的*溶液、無菌7.5％（w/v）*溶液，加注射用水（水溫20℃～30℃）至規(guī)定體積，混勻。3)如果必要，用1mol/L*溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。4)溶液應(yīng)在2℃－8℃下避光保存。原代骨細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基*ATCC細(xì)胞規(guī)格:500/250/100原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基*規(guī)格:500/250/10

人源細(xì)胞爬片的免疫熒光步驟2017/04/27: 1.取出人源細(xì)胞爬片放到35mm或60mm用過的細(xì)胞培養(yǎng)皿里，PBS洗三遍。注意：有的時(shí)候作的細(xì)胞爬片可能比較小，因此夾取的時(shí)候要小心，注意反正面，放在皿里洗比較方便，避免了來回夾取，另外洗的時(shí)候加PBS不要太沖，不要細(xì)胞沖下來。洗的時(shí)候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，沒有等5分鐘或10分鐘。2.4%冷的多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3.0.2%TritonX-100通透10分鐘，PBS洗三遍。4.人源細(xì)胞與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍。5.一抗4度濕盒內(nèi)過夜，也可37度

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