（貨號：WLB5001）

原理概述：

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴增技術(shù)：在常溫恒溫下，重組酶和引物形成蛋白/單鏈核苷酸的復(fù)合體Rec/ssDNA，在輔助蛋白和單鏈結(jié)合蛋白SSB的幫助下，侵入雙鏈DNA模板；在侵入位點形成D-loop區(qū)域，并開始對DNA雙鏈進行掃描；待找到與引物互補的目的區(qū)域后，復(fù)合體Rec/ssDNA解體的同時，聚合酶也結(jié)合到引物的3’末端，開始鏈的延伸。

產(chǎn)品特點：

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強、反應(yīng)時間短（僅需30 mins）等優(yōu)點。金屬浴、水浴鍋等即可進行反應(yīng)操作，無需購買PCR擴增儀等價格高昂的設(shè)備。

引物設(shè)計：

建議使用長度在30-35 bp的引物，引物過短會影響擴增速度和檢測靈敏度；引物設(shè)計避免形成二級結(jié)構(gòu)而影響擴增；擴增子長度建議在150-300 bp，通常不超過500 bp。

試劑盒組成：

試劑盒儲存：

運輸條件：低溫運輸；

儲存條件：儲存溫度 ≤ -20 oC，避光保存，避免重壓，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品有效期：6個月。

操作步驟：提前將試劑盒所需組分取出，冰上或低溫下融化（C buffer可室溫融化），震蕩混勻。

1) 向無菌0.2mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer；

2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物；

3) 加入1.5μL dNTPs；

4) 向反應(yīng)管中加入12 μL P-core（步驟1~4可以混合后再分裝至反應(yīng)管中）；

5) 向反應(yīng)管中加入2.5μL ddH₂O和2.5 μL核酸模板（可根據(jù)核酸濃度和實驗需求調(diào)整加入的核酸模板體積，并相應(yīng)調(diào)整加入的ddH₂O體積，至模板與ddH₂O總體積為5 μL）；

6) 最后向反應(yīng)管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（加入B buffer反應(yīng)立即被啟動）；上下顛倒混勻后（請務(wù)必保證充分混勻），將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，然后立即將反應(yīng)管放入恒溫設(shè)備中：37~42 oC恒溫孵育，時間30 mins；

7) 反應(yīng)結(jié)束后，如需進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，請加入50 μL酚/氯仿，1:1抽提反應(yīng)液，12000 rpm離心5 mins，取5 μL上清進行電泳檢測。

體系配制

注意事項：

• 為保證液體試劑組分活性，請保證儲存溫度 ≤ -20 oC；試劑使用時請保持低溫，避免高溫放置過長時間；
• 在進行反應(yīng)時請注意避免微量核酸染，并盡量考慮設(shè)置空白對照以確認是否有核酸污染。