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生化試劑的技術(shù)分類(lèi)2022/08/22: 生化試劑的技術(shù)分類(lèi):1.生化分離與分析技術(shù)光譜技術(shù)已從單一的比色法發(fā)展為采用分光光度法、透射比濁法、原子吸收和火焰發(fā)射光譜法、分子熒光光譜法。分離技術(shù)除了一般的離心和超離心技術(shù)外，還有層析技術(shù)和電泳技術(shù)。層析技術(shù)包括薄層層析、凝膠層析、離心交換層析、親和層析、氣相層析、高效液相色譜（HPLC）等等。電泳技術(shù)中紙電泳、醋酸纖維膜電泳的應(yīng)用已明顯減少，瓊脂糖電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAG）應(yīng)用增多，目前已有自動(dòng)電泳儀。2.自動(dòng)分析與酶法分析近年來(lái)我國(guó)引進(jìn)了自動(dòng)生化分析儀用以監(jiān)測(cè)酶活性，分析的酶范圍

冠蛋白3抗體制備過(guò)程2022/08/15: 冠蛋白3抗體制備過(guò)程：1.免疫原的制備普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。2.免疫動(dòng)物常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。3.免疫血清的收集一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。4.免疫

骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體鑒定2022/08/08: 骨形態(tài)發(fā)生蛋白9抗體鑒定：1、效價(jià)的鑒定：抗體含量測(cè)定。根據(jù)抗原性質(zhì)不同，顆粒性抗原可采用凝集試驗(yàn)。可溶性抗原常用免疫雙擴(kuò)散法2、抗體的純度鑒定：SDS-PAGE。若只出現(xiàn)一條蛋白電泳區(qū)帶說(shuō)明抗體純化已達(dá)到要求，而出現(xiàn)多條蛋白區(qū)帶則表明抗血清中混有雜蛋白，必須進(jìn)一步純化。3、特異性鑒定：抗體對(duì)相應(yīng)或相似抗原識(shí)別能力一般用特異性抗原及其相似的抗原與待鑒定抗體進(jìn)行免疫雙擴(kuò)散試驗(yàn)。如果出現(xiàn)交叉反應(yīng)，說(shuō)明有雜抗體存在?？蓱?yīng)用相應(yīng)抗原吸收雜抗體，即可得到單價(jià)特異性抗體。4、抗體親和力鑒定：親和力高則靈敏度

小鼠Ⅲ型前膠原肽elisa試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備2022/08/01: 小鼠Ⅲ型前膠原肽elisa試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：ELISA進(jìn)口試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。1、血清室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。2、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。3、尿液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（20

引物設(shè)計(jì)的原則2022/07/25: 引物設(shè)計(jì)的原則：1.引物長(zhǎng)度：一般為15-30bp，常用的是18-27bp，但不能大于38，因?yàn)檫^(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃，即Taq酶的最適溫度。2.引物的特異性：引物與非特異擴(kuò)增序列的同源性不要超過(guò)70%或有連續(xù)8個(gè)互補(bǔ)堿基同源。3.序列Tm值：引物的Tm值一般控制在55-60度,盡可能保證上下游引物的Tm值一致,一般不超過(guò)2度。退火溫度=4×(G+C)+2×(A+T)-(5～8)4.G+C含量：有效引物中(G+C)的比例為40-60%，過(guò)高或過(guò)低都不利于引發(fā)反應(yīng)。上下游引物的GC含量不能

簡(jiǎn)述標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)2022/07/18: 標(biāo)準(zhǔn)品的分級(jí)：⒈一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品（原級(jí)參考物）物質(zhì)穩(wěn)定而均一，數(shù)值由決定性方法確定，或由高度準(zhǔn)確的若干方法確定，所含雜質(zhì)也已經(jīng)定量。它可用于校正決定性方法，評(píng)價(jià)及校正參考方法以及為“二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品”定值。一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品都有證書(shū)，在美國(guó)由國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)局（NBS）發(fā)給合格證書(shū)，并指明它的性質(zhì)和有關(guān)數(shù)據(jù)。⒉二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品（次級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品）或是純?nèi)芤海ㄋ蛴袡C(jī)溶劑的溶液），或存在于相似基質(zhì)中。這類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品可由實(shí)驗(yàn)室自己配制或?yàn)樯唐罚渲杏嘘P(guān)物質(zhì)的量由參考方法定值或用一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品比較而確定，主要用于常規(guī)方法的標(biāo)化或?yàn)榭刂莆锒ㄖ?。⒊控?

實(shí)驗(yàn)移液器正確移液過(guò)程2022/07/12: 實(shí)驗(yàn)移液器正確移液過(guò)程：1、移液浸入的角度：保持垂直狀態(tài)，最多不能超過(guò)20°。傾斜吸液會(huì)造成氣壓面的改變，增大移液誤差。2、吸頭浸入深度：正確的吸頭浸入深度可以有效的減少取液誤差。3、吸液速度：勻速。過(guò)快的吸液速度，容易使樣品形成漩渦，產(chǎn)生氣泡；樣品液易進(jìn)入套柄，對(duì)活塞和密封圈造成損傷；帶入氣霧造成樣品的交叉污染；特別是1ml以上的液體，很容易造成液體上沖。吸完后最好能在液面內(nèi)停留1-3秒。4、排液及吹液：排液：將活塞按壓至第一檔排液；吹液：繼續(xù)下壓活塞按鈕，到達(dá)第二停止點(diǎn)或通過(guò)第二停止點(diǎn)直至底

血清使用時(shí)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法2022/07/05: 血清使用時(shí)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法：1、保存血清的方法：血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若您一次無(wú)法用完一瓶，建議將無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2、如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是，溶解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。3、如何避免沉淀物的產(chǎn)生？1）.解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法（-2O℃至4℃至室溫），若血清解凍時(shí)改變的溫度太大（如-20℃至37℃），實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)

影響化學(xué)試劑質(zhì)量的因素2022/06/28: 化學(xué)試劑的妥善保存化學(xué)試劑還沒(méi)一個(gè)保質(zhì)期的具體要求和界限。但化學(xué)試劑的管理通常要求“妥善”保存，做到“八防”(防揮發(fā)、防潮、防變質(zhì)、防毒害、防光、防震、防鼠害、防火)。變質(zhì)試劑是導(dǎo)致分析誤差的主要原因之一，遇到下列情況易出現(xiàn)試劑的變質(zhì)：1、空氣的影響空氣中的氧易使還原性試劑氧化而破壞。強(qiáng)堿性試劑易吸收二氧化碳而變成碳酸鹽，水分可以使某些試劑潮解、結(jié)塊;纖維、灰塵能使某些試劑還原、變色等。2、溫度的影響試劑變質(zhì)的速度與溫度有關(guān)。夏季高溫會(huì)加快不穩(wěn)定試劑的分解;冬季嚴(yán)寒則促使甲醛聚合而沉淀變質(zhì)。3、

大鼠骨成型蛋白受體1A ELISA試劑盒操作步驟2022/06/21: 大鼠骨成型蛋白受體1AELISA試劑盒特點(diǎn)：1、適用于血清、血漿、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。2、可檢測(cè)動(dòng)物類(lèi)型豐富：人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、豬、犬、牛、綿羊、雞、蝦、魚(yú)等。3、可檢測(cè)指標(biāo)齊全：白介素，干擾素，肺炎衣原體，血管緊張素，炎癥因子、血管生成素、動(dòng)脈粥樣硬化因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子基質(zhì)金屬蛋白酶、脂肪因子等等指標(biāo)。大鼠骨成型蛋白受體1AELISA試劑盒操作步驟：1.取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。2.分組：取出96孔板，根據(jù)待測(cè)樣

細(xì)胞分離與培養(yǎng)操作規(guī)程2022/06/14: 分離與培養(yǎng)：1、無(wú)菌條件下，取出1-3d齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大??；2、往組織塊中加入4mL酶消化液（0.1%yi酶和0.1%I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10%FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；4、用200目不

鋅指蛋白231抗體鑒定2022/06/10: 鋅指蛋白231抗體鑒定：1、抗體的效價(jià)鑒定：鑒定效價(jià)的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。2、抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。抗體的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線(xiàn),計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時(shí)的濃度,并按公

通用型基因組DNA提取試劑盒反應(yīng)五要素2022/06/07: 通用型基因組DNA提取試劑盒反應(yīng)五要素：參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：①引物長(zhǎng)度：15-30bp，常用為20bp左右。②引物擴(kuò)增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。③引物堿基：G+C含量以40-60%為

抗生素的特點(diǎn)與作用機(jī)理2022/05/31: 抗生素（antibiotics）是由微生物（包括細(xì)菌、真菌、放線(xiàn)菌屬）或高等動(dòng)植物在生活過(guò)程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的一類(lèi)次級(jí)代謝產(chǎn)物，能干擾其他生活細(xì)胞發(fā)育功能的化學(xué)物質(zhì)?，F(xiàn)臨床常用的抗生素有轉(zhuǎn)基因工程菌培養(yǎng)液液中提取物以及用化學(xué)方法合成或半合成的化合物?？股厥羌?xì)菌、霉菌或其他微生物的代謝產(chǎn)物或人工合成的類(lèi)似物，通俗地講，抗生素就是用于治療各種細(xì)菌感染或抑制致病微生物感染的藥物。其主要用途是抑制其他種類(lèi)微生物的生長(zhǎng)（抑菌作用）或?qū)⑺鼈儦⑺溃⒕饔茫?，一般情況下對(duì)其宿主不會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的

熒光標(biāo)記抗體注意事項(xiàng)2022/05/23: 熒光標(biāo)記抗體注意事項(xiàng)：1）對(duì)熒光標(biāo)記的抗體的稀釋?zhuān)ＷC抗體的蛋白有一定的濃度，一般稀釋度不應(yīng)超過(guò)1：20。2）染色的溫度和時(shí)間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化，染色時(shí)間可以從10min到數(shù)小時(shí)，一般30min已足夠。3）為了保證熒光染色的正確性，*試驗(yàn)時(shí)需設(shè)置下述對(duì)照：①標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照：標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L，pH7.4的PBS。②特異性對(duì)照（抑制試驗(yàn)）：標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體，再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。③陽(yáng)性對(duì)照：已知的陽(yáng)性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體。4）一般標(biāo)本在高壓汞燈下

單氨氧化酶A抗體保存要點(diǎn)2022/05/09: 單氨氧化酶A抗體保存要點(diǎn):1、收到抗體后需先在12000rpm離心1-5分鐘，再打開(kāi)管蓋進(jìn)行分裝和保存，如果抗體體積不足50ul，可延長(zhǎng)離心時(shí)間至5分鐘，從而確?？贵w全部離心下來(lái)。2、對(duì)于大部分抗體，比較合適的保存方式是分裝后保存在-20℃或-80℃，也可4℃短暫保存1-2周，并不影響抗體活性。①對(duì)絕大多數(shù)抗體來(lái)說(shuō)，保存在-20℃即可。如果抗體在2周內(nèi)會(huì)使用，推薦在4℃保存，這是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害。如果要長(zhǎng)期保存則最好是在-20℃或-80℃。當(dāng)然最關(guān)鍵的是按照說(shuō)明書(shū)的推薦來(lái)進(jìn)行保存

elisa分析檢測(cè)試劑盒技術(shù)原理2022/05/05: elisa分析檢測(cè)試劑盒性能：1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。2.靈敏度：*低檢測(cè)濃度小于10pg/ml。3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。elisa分析檢測(cè)試劑盒技術(shù)原理：1.抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。2.結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。3.酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。4.受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也

抗體流式免疫組化的免疫學(xué)功能2022/04/24: 抗體流式免疫組化的免疫學(xué)功能：1、中和（Neutralization）這是抗體最基本的功能?？贵w的中和指的是抗體和抗原結(jié)合后，抗原失去原有的功能。比如病毒的糖蛋白無(wú)法和細(xì)胞受體結(jié)合，酶無(wú)法進(jìn)行催化，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白無(wú)法轉(zhuǎn)運(yùn)等等。中和是抗體自身的功能，僅由抗體的分子結(jié)構(gòu)決定，不需要免疫系統(tǒng)的其它部分參與。2、凝集（Agglutination）抗原和抗體結(jié)合后會(huì)凝集成一團(tuán)，失去行動(dòng)力，有利于免疫系統(tǒng)的清除。3、調(diào)理（Opsonization）抗體和抗原結(jié)合會(huì)促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)抗原的吞噬。由于細(xì)胞膜帶負(fù)電會(huì)互相排

細(xì)胞凍存的步驟2022/04/19: 細(xì)胞凍存的步驟：1、冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基，觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情形。2、使用ScienCell凍存液（貨號(hào)：0133）混合均勻，置于室溫下待用。3、依細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作，收集培養(yǎng)好的細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸浮液(約0.1ml)計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。4、離心，去除上清液，加入適量冷凍保存溶液，使細(xì)胞濃度為1-5x10^6cells/ml，混合均勻，分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中，1ml/vial，并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測(cè)。5、冷凍保存方法1:冷凍管置于4度10分鐘→-20度30分鐘→-80度1

生化試劑使用注意事項(xiàng)2022/04/13: 生化試劑使用注意事項(xiàng)1、儲(chǔ)存溫度要求高的物品時(shí)，需要設(shè)定好溫度參數(shù)，且箱內(nèi)溫度達(dá)到設(shè)定值后才可以放入物品。2、物品的放置要求：物品不能將風(fēng)扇進(jìn)出口堵塞，物品與物品之間、物品與恒溫箱內(nèi)壁之間必須有10mm以上的空隙，以利于箱內(nèi)溫度的均勻。3、設(shè)定溫度與箱內(nèi)溫度相差大時(shí)，則需要一定時(shí)間調(diào)整。一般情況下，可能需要1-2小時(shí)溫度更為準(zhǔn)確。4、產(chǎn)品在設(shè)定的恒溫過(guò)程中，具備高低溫報(bào)警，溫感故障報(bào)警等功能；當(dāng)機(jī)器因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間開(kāi)門(mén)貨自身故障造成溫度偏差過(guò)大，箱體蜂鳴器鳴響，連續(xù)鳴叫，直接按任意鍵；便于對(duì)儲(chǔ)存物品實(shí)

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