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抗原幾個基本條件2023/08/01

構(gòu)成抗原的基本性質(zhì)，一般須具備如下幾個基本條件：異源物質(zhì)、有一定的分子量、有較復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)、特異性。1、異源物質(zhì)：在正常情況下，只有異體物質(zhì)進入體內(nèi)才可能具有免疫原性。一般說，這種異體物質(zhì)必須是動物機體產(chǎn)生抗體的細胞所未接觸過的異物，動物蛋白質(zhì)的免疫原性與動物在系統(tǒng)分類上的親疏程度程負相關(guān)。血緣關(guān)系相距越遠，生物種系差異越大，免疫原性越好。此類不同種屬的異體抗原稱之為異種抗原。同種間不同個體的某些成分，也有一定的抗原性，此類同種動物不同個體的抗原稱之為異體抗原。在特殊情況下，自身組織也會產(chǎn)生免

ELISA樣品處理和移液技術(shù)注意事項2023/07/17

試劑和樣品處理不當或儲存不正確會影響下游分析，因為不同的緩沖劑和試劑會有不同的儲存要求。例如，有些必須儲存在冰箱里，有些在室溫下，有些用感光罩（如鋁箔）。如果有計劃在未來的實驗中使用相同的樣品，那么應(yīng)該把它們放入等分試樣中，需要時再取出來。這將避免多次冷凍/解凍循環(huán)，保持準確的結(jié)果。當樣品準備使用時，應(yīng)在冰上解凍（或根據(jù)方案）。移液技術(shù)注意事項要點如下：1.移液時，槍頭應(yīng)對準孔，避免接觸孔壁及底部。2.移液后輕輕晃動混勻試劑。3.如果您的樣品具有黏性，請預(yù)先潤洗槍頭以消除表面張力的影響。吸液時等

探究酶的特性實驗材料及選擇鑒定的試劑2023/07/10

酶的特性包括酶的高效性、酶的專一性、作用條件較溫和（溫度和PH對酶的活性有影響）。常見的實驗材料及選擇鑒定的試劑：1、H2O2：*在FeCl3和*酶的催化及高溫條件下分解，可通過觀察氣泡的多少體現(xiàn)反應(yīng)速率。2、淀粉：淀粉可在淀粉mei催化作用下生成麥芽糖，可用碘液檢測淀粉，以確定反應(yīng)是否結(jié)束；用斐林試劑檢測麥芽糖，以確定反應(yīng)是否開始。3、蔗糖：可在蔗糖酶的催化作用下生成葡萄糖和果糖，可用斐林試劑檢測生成物的量。4、麥芽糖：麥芽糖可以在麥芽糖酶的催化作用下生成葡萄糖，麥芽糖和葡萄糖均為還原糖，均用

小鼠骨形成蛋白（BMPs）ELISA試劑盒實驗注意事項2023/06/26

小鼠骨形成蛋白（BMPs）ELISA試劑盒實驗注意事項：1、試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。2、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6、洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。7、

大鼠肝細胞培養(yǎng)基本條件2023/06/12

大鼠肝細胞培養(yǎng)基本條件：1、合適的細胞培養(yǎng)基合適的小鼠源細胞培養(yǎng)基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細胞營養(yǎng)和促使細胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2、優(yōu)質(zhì)血清目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。3、無菌無毒細胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體外培養(yǎng)的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身

貼壁細胞傳代參考2023/06/05

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新

血清購買注意點2023/05/29

血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長，而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細胞的生長，某些批次血清可能含有毒性或抑制細胞生長的物質(zhì)。因此，在購買大量血清之前，必須對血清支持細胞生長能力進行檢測，然后再大量購買質(zhì)量好的同一批號的血清，并注意以下幾點：1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃–70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10％，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。2、一般廠商提

ELISA試驗包被各條件選擇介紹2023/05/23

1.包被抗原的選擇包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被，對于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應(yīng)使抗原固相化)。經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，往往難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián)，偶聯(lián)物吸附于固相載體上。2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，如果包被的抗原在堿性條

PCR引物設(shè)計和選擇遵循原則2023/05/15

PCR反應(yīng)產(chǎn)物的特異性由一對上下游引物所決定。引物的好壞往往是PCR成敗的關(guān)鍵。引物設(shè)計和選擇目的DNA序列區(qū)域時可遵循下列原則：1、引物長度約為16-30bp，太短會降低退火溫度影響引物與模板配對，從而使非特異性增高。太長則比較浪費，且難以合成。2、引物中G+C含量通常為40%-60%，可按下式粗略估計引物的解鏈溫度Tm＝4(G+C)+2(A+T)。3、四種堿基應(yīng)隨機分布，在3'端不存在連續(xù)3個G或C，因這樣易導(dǎo)致錯誤引發(fā)。4、引物3'端最好與目的序列閱讀框架中密碼子第一或第二位核苷酸對應(yīng)，以

探討標準物質(zhì)特性2023/05/08

標準物質(zhì)是具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料，用以校準設(shè)備、評價測量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì)，作為分析測量行業(yè)中的“量具”。標準物質(zhì)是一種材質(zhì)均勻、性能穩(wěn)定的物質(zhì)，它的某個（些）化學和物理性質(zhì)（也包括工程特性）已經(jīng)準確定值，并附有定值的不確定度。標準物質(zhì)的特性有如下五大類：1、化學成分類：標準物質(zhì)，純的化合物或是有代表性的基體樣品，天然的或添加(被)分析物的(如，用作農(nóng)藥殘留分析的添加了殺蟲劑的動物脂肪)，以一種或多種化學或物理化學特性值表征。2、生物和臨床特性類：與目錄A相似的標準

ELISA技術(shù)的七個*性2023/05/04

ELISA技術(shù)的*性：（一）靈敏度高雖然酶活性調(diào)節(jié)ELISA方法的靈敏度目前并不十分理想，但在酶活性放大ELISA中，檢測的靈敏度遠比RIA高。根據(jù)質(zhì)量作用定律。即免疫反應(yīng)所形成的免疫復(fù)合物量與反應(yīng)物濃度成正比。推測所檢測的待測物分子數(shù)為1。已知1個摩爾濃度含6.02×1023個分子，那么理論推測酶活性放大Elisa方法的zui低檢測限可達1.7×10-24mol/L。雖然在實際應(yīng)用中由于反應(yīng)條件和試劑純度以及儀器精度等因素的影響，往往達不到這個水平（大于104個分子），但表明Elisa在靈敏度

細胞培養(yǎng)中的污染源是哪些？2023/04/23

細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。細胞常規(guī)培養(yǎng)是在細胞房中進行，在超凈工作臺或生物安全柜中，把細胞處理好，根據(jù)需要加入細胞培養(yǎng)基，放入細胞培養(yǎng)瓶/皿或細胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)過程中如果操作不當或者條件控制不合適容易受到化學或者生物因素的污染，常見的污染源有：1.細菌污染細菌污染是實驗室細胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細胞培

顆粒酶K抗體的主要功能2023/04/20

抗體是一種被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，是一種免疫球蛋白。它的產(chǎn)生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細胞相互作用，使淋巴細胞中的B細胞增殖分化而形成漿細胞（效應(yīng)B細胞），漿細胞可產(chǎn)生分泌抗體。抗體的主要功能：1、抗體能抑制病原體的生長繁殖，比如抗病菌的抗體就使入侵的病菌發(fā)生凝集，不讓病菌吸取營養(yǎng)，饑餓的病菌就不能繁殖了。2、抗體能阻止病毒或病菌靠近人體細胞，入侵者不能靠近人體細胞，就不能黏附在細胞上，它就不能破壞人體細胞，不能形成感染。3、抗體可以中和病毒，比如乙

熒光定量PCR儀硬件設(shè)計特點2023/04/11

熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等，每種設(shè)計都有它的獨到之處但也都有無法避免的缺憾。傳統(tǒng)的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大，而且無需特殊的耗材。有些傳統(tǒng)的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測，這些光學結(jié)構(gòu)在96孔板的頂部，每個樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同——邊緣效應(yīng)，對結(jié)果產(chǎn)生影響。為了保證精確、準確的實驗結(jié)果，這類儀器在實驗過程中通常會使用ROX(一種熒光染料)或?qū)Ｓ玫腞eferencedye作為參照校正實驗結(jié)果。鹵鎢燈的使用壽命短、更換成本較高已經(jīng)成為

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞原代培養(yǎng)2023/03/20

小鼠胚胎成骨細胞前體細胞原代培養(yǎng)：1、取約500mg脂肪組織（自外科手術(shù)患者的皮下獲?。?，再將脂肪組織一次擠壓進入準備好的15m離心管中，每個離心管中的組織不超過5ml。2、吸取緩沖液PBS7ml加入到上述裝有組織的離心管中，用吸管吹打10~20次，然后靜置1min左右，用吸管將組織下層的液體吸出。如此反復(fù)直到所吸出的液體呈透明狀，不帶有血細胞為止。3、向有的試管中加入與組織量相同大約5ml左右的消化液（yi酶0.25%，I型膠原酶0.1%以1：1比例混合配制而成），將試管密封，放入37°C恒溫

淺談抗體實驗原理2023/03/13

抗體實驗原理:1、特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細胞，通常需要補體或吞噬細胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。2、激活補體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補體。3、結(jié)合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細胞，參與免疫應(yīng)答。4、可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被

組織培養(yǎng)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)有哪些2023/03/13

組織培養(yǎng)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與體內(nèi)細胞基本相同，但在大體形態(tài)以及某些細微結(jié)構(gòu)方面仍存在著一定的差異。根據(jù)細胞是否貼附于支持物上生長，形態(tài)有所不同。呈懸浮生長時，不論細胞原來源于體內(nèi)何種類型細胞.由于生長在液體環(huán)境中，胞體基本呈圓形。大多數(shù)細胞是貼附型生長的。當細胞貼附在支持物上后，細胞分化現(xiàn)象常變得不顯著，易失去它們在體內(nèi)時的原有特征.在形態(tài)上表現(xiàn)單一化的現(xiàn)象。貼附于支持物表面后，開始仍為圓形，但為時很短，很快便經(jīng)過形態(tài)演變過渡成扁平形態(tài)。1.成纖維細胞型：此細胞形態(tài)與體內(nèi)成纖維細胞的相似而得名，胞體呈

選擇合適的血清簡要介紹2023/03/06

血清是細胞培養(yǎng)中唯yi外源添加的成分不確定的物質(zhì)，血清的質(zhì)量對實驗成敗起著關(guān)鍵性作用，但血清使用不當也可能會導(dǎo)致血清質(zhì)量下降，造成細胞培養(yǎng)效果不理想。怎樣選擇合適的血清下面簡要介紹：目前市面上的血清產(chǎn)品五花八門，各種品牌宣稱來自各個血源地，讓人眼花繚亂。可以確定的是，除了所謂的“水貨"，它們當中絕大多數(shù)都是質(zhì)量合格的產(chǎn)品。但合格不一定好用，或者說適用于某一種細胞。要確定一款血清的性能，或者從眾多血清來源中挑選一款，唯yi的辦法就是篩選驗證。血清的篩選驗證主要包括：形態(tài)驗證、增殖能力測試和克隆形成

PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整步驟2023/02/27

一旦確定反應(yīng)被抑制或效率較低，則可采取一些步驟將效率值重新調(diào)整到理想范圍內(nèi)。1、對于抑制作用，可去除模板濃度最高的反應(yīng)孔并重新分析標準曲線。如果效率重新回到110%以下，則分析良好。2、另一種解決方案是重新純化模板。切記應(yīng)延長干燥時間，以去除乙醇沉淀過程中的乙醇，或采用另外的柱上洗滌液將離液鹽從硅膠純化物中去除。3、通過分析優(yōu)化可解決效率低下的問題。此過程有時相對簡單，但在某些情況下，隨著分析復(fù)雜度的提高，優(yōu)化過程可能十分耗時費力。4、擴增單個產(chǎn)物時，將鎂的濃度提升至6mM可提高反應(yīng)效率，但當出

RT-PCR反應(yīng)注意事項2023/02/20

逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)((ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)該技術(shù)主要用于：分析基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構(gòu)建RNA高效轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。反應(yīng)注意事項：1．在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂。2．為了防止非特異性擴增，必須設(shè)陰性對照。3．內(nèi)參的設(shè)定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內(nèi)參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫氫酶）、β-Actin（β-肌動蛋白