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單克隆抗體（單抗制備）制備過程步驟2022/04/02

單克隆抗體制備的原理:要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆B淋巴細胞，但這種B淋巴細胞不能在體外生長。而實驗發(fā)現骨髓瘤細胞可在體外生長繁殖，應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與免疫的淋巴細胞二者合二為一，得到zha種的骨髓瘤細胞。這種zha種細胞繼承兩種親代細胞的特性，它既具有B淋巴細胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細胞能在體外培養(yǎng)增殖永存的特性，用這種來源于單個融合細胞培養(yǎng)增殖的細胞群，可制備抗一種抗原決定簇的特異單克隆抗體。單克隆抗體（單抗制備）制備過程步驟：一、細胞免疫免疫動物免疫動

收到細胞具體處理過程2022/03/29

收到細胞具體處理過程：1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）。2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記

發(fā)酵纖維單胞菌保存方法2022/03/22

低溫存法：①腸膜明串珠菌說明書簡單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1～2個月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3～4個月；②液氮超低溫保存法，將生長穩(wěn)定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中，密封于安瓿管內，然后控制冷卻速度，使安瓿管溫度逐步下降至-35℃時，即可置于-150～-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲

抗原抗體反應影響因素2022/03/15

抗原抗體反應影響因素：1、電解質：抗原和抗體通常為蛋白質分子，等電點分別為pH3～5和pH5～6，在中性或:弱堿性的環(huán)境中，表面均帶負電荷，適當濃度的電解質會使他們失去一部分負電荷而相互結合，出現肉眼可見的凝集或沉淀現象：在抗原抗體反應中，常用0.85%的NaCI溶液或各種緩沖液作為抗原、抗體的稀釋液，以提供適當濃度的電解質。2、溫度：抗原抗體反應必須在適宜的溫度中進行，一般為15～40℃，通常最適為37℃。一定范圍內，溫度升高，可促進抗原抗體分子問的碰撞機會，加速抗原抗體復合物的形成，加快可見

分享生化試劑的種類2022/03/07

生化試劑的種類：主要有電泳試劑、色譜試劑、離心分離試劑、免疫試劑、標記試劑、組織化學試劑、透變劑和致癌物質、殺蟲劑、培養(yǎng)基、緩沖劑、電鏡試劑、蛋白質和核酸沉淀劑、縮合劑、超濾膜、臨床診斷試劑、染色劑、抗氧化劑、防霉劑、去垢劑和表面活性劑、生化標準品試劑、生化質控品試劑、分離材料等等。1、免疫試劑包括抗體及抗血清、正常血清及補體、抗原、免疫組織化學研究用試劑、細胞培養(yǎng)用試劑、細胞分離試劑、凝膠內擴散法及電泳試劑等。2、基因工程用試劑包括基因表達與基因重組、人工合成蛋白、激素、核酸合成試劑、核酸制j

白介素ELISA試劑盒實驗中的顯色和比色2022/03/01

白介素6（IL-6)ELISA試劑盒實驗中的顯色和比色1、顯色顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應，此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中，加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行，時間一般不需要嚴格控制，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間，及時判斷。OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應2

細胞復蘇操作步驟2022/02/22

在實際操作中，凍存細胞要進行復蘇，再培養(yǎng)傳代。復蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內，再次形成胞內結晶損傷細胞。細胞復蘇操作步驟：1．佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出冷凍管。2．迅速放入37℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內使其*融化，然后在無菌下取出細胞。3．在150g速度下離心5～10分鐘，棄去上層液4．加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109cell/L，置37℃溫箱靜置培養(yǎng)5．次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。6．若細胞密度較高

?酯香微桿菌的分離方法2022/02/15

酯香微桿菌的分離方法：1、施加選擇性壓力分離法：主要是利用不同種類的微生物其生長繁殖對環(huán)境和營養(yǎng)的要求不同,如溫度、pH、滲透壓、氧氣、碳源、氮源等,人為控制這些條件,使之利于某類或某種微生物生長,而不利于其他種類微生物的生存,以達到使目的菌種占優(yōu)勢.而得以快速分離純化的目的。如可以控制培養(yǎng)時的氧,可將好氧微生物和厭氧微生物分開;通過控制溫度,可將嗜熱微生物和非嗜熱微生物分開;控制pH,可將嗜酸、嗜堿微生物分離等。在分離培養(yǎng)基中也可以加入不同的抗生素或試劑來增加選擇性。如在分離放線菌和細菌時,可

轉基因大豆EPSPS基因核酸檢測試劑盒原則2022/01/28

PCR試劑盒原則：1、引物長度：15-30bp，常用為20bp左右。2、引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。4、避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。5、引物3'端的堿基，特別是末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配

熒光定量PCR試劑盒樣品RNA的抽提過程2022/01/18

樣品RNA的抽提過程：1、取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。2、兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。3、RNA沉淀將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵

四個主要原因決定了科研抗體穩(wěn)定性良好2022/01/11

抗體在室溫、37℃保存與-20℃保存具有一樣的活性與穩(wěn)定性。之所以這種抗體具有這樣良好的穩(wěn)定性，主要原因有四個方面：1.抗體分子的高Tm值有數據表明，在70℃時抗體分子才開始明顯地去折疊（unfold），而這一過程之前的變化也具有相當的可逆性。也就是說，在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60度，抗體分子都能維持正確折疊，保持應有的活性。2.抗體純度高純度的抗體產品，去除了包括各種蛋白酶在內的雜質，保證了抗體的穩(wěn)定性。撫生采用先進的抗體純化技術，確?？贵w產品的高純度，保障其抗體產品的穩(wěn)定性。3.抗

ELISA試劑盒實驗需要重點注意點2022/01/05

ELISA試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗體ELISA檢測，自從60-70年代問世以來，得到quan世界科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發(fā)展。Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。為了保證ELISA試劑盒實驗質量，我們需要掌握一些小技巧以助于實驗的成功，在實驗操作的過程中，我們除了需要多點細

介紹細胞培養(yǎng)需的特定條件2021/12/29

有關細胞培養(yǎng)的知識，我們不僅需要它的基本成分，種類，還要知道一些關于儲存的方法，下面就關于細胞培養(yǎng)需要哪些特定的條件。1、合適的細胞培養(yǎng)基合適的細胞培養(yǎng)基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細胞營養(yǎng)和促使細胞生長增殖的基礎物質，而且還提供培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。2、血清目前，大多數合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。3、無菌無毒細胞培養(yǎng)環(huán)境無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。在體

免疫共沉淀的優(yōu)缺點2021/12/21

免疫共沉淀的優(yōu)點1.相互作用的蛋白質都是經翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)。2.蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進行的，可以避免人為的影響。3.可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物。免疫共沉淀的缺點1.可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；2.兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；3.必須在實驗前預測目的蛋白是什么，以選擇最后檢測的抗體，所以，若預測不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。

論述熒光原位雜交優(yōu)點主要體現2021/12/15

熒光原位雜交技術技術原理是將熒光素直接或間接標記的核酸探針[或生物素、dinitrophenyl（I）NP）aminoacetylAAFfluorine（AAF）等標記的核酸探針與待測樣本中的核酸序列按照堿基互補配對的原則進行雜交，經洗滌后直接在熒光顯微鏡下觀察。熒光原位雜交技術是一種重要的非放射性原位雜交技術，原理是利用報告分子（生物素）標記核酸探針，然后將探針與染色體或DNA纖維切片上的靶DNA雜交，若兩者同源互補，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。此時可利用該報告分子與熒光素標記的特異親

血清主要包括類目2021/12/09

胎牛血清主要成分：血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物，其主要由水和各種化學成分組成,包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白、甘油三酯、總膽固醇、谷丙轉氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質對促進細胞生長或抑制細胞生長，從而達到生命機體的生理平衡。血清類目齊全，主要包括：①動物血清系列：如馬血清、山羊血清、綿羊血清、兔血清、雞血清、豬血清、大牛血清、小牛血清、胎牛血清、狗血清、驢血清、大鼠血清、小鼠血清等等；②血漿系列：胎牛血漿

夾心ELISA封閉和加樣過程2021/11/29

夾心ELISA測定兩層抗體（捕獲抗體和檢測抗體）之間的抗原。目標抗原必須包含至少兩個能夠結合到抗體的抗原表位。單克隆或多克隆抗體均可在夾心ELISA系統中用作捕獲抗體和檢測抗體。單克隆抗體識別單一表位，可對抗原中微小差別進行定量檢測。多克隆抗體通常用作捕獲抗體以沉降盡可能多的抗原。夾心ELISA省去了分析之前的樣品純化步驟，而且提高了分析靈敏度（靈敏度比直接或間接ELISA高2-5倍）。封閉和加樣過程：1.每孔添加200μL封閉緩沖液（5%脫脂奶粉/PBS），封閉包被孔中剩余的蛋白質結合位點。2

介紹判斷Hyclone胎牛血清質量方法2021/11/24

HyClone胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物生長因子、激素、無機物等，這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。如何儲存和解凍Hyclone胎牛血清才不會使產品質量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在

ELISA實驗原理及常用方法2021/11/17

實驗原理：1.包被：抗原/抗體，固相化2.反響：1)待測抗體/抗原；2)酶標抗原/抗體3.洗滌：使結合在固相上的抗原抗體復合物與未結合的別離4.底物顯色：定性/定量剖析常用方法：1.間接法檢測抗體常用的辦法,首要用于對病原體抗體的檢測。優(yōu)勢：二抗能夠加強信號，并且有多種挑選能做不同的測定剖析。不加酶符號的一級抗體則能保留它多的免疫反響性。缺陷：交互反響發(fā)生的機率較高2.雙抗體夾心法檢測大分子抗原常用的辦法。優(yōu)勢：高活絡、高專一性，抗原無須事前純化。缺陷：抗原必定得具有兩個以上的抗體結合部位。3.

?酶免疫組化的關鍵操作步驟2021/11/08

1、標本固定：固定的目的是①防止標本從玻片上脫落；②除去防礙抗原-抗體結合的類脂，使抗原抗體結合物易于獲得良好的染色結果；③固定的標本易于保存。2、脫水、石蠟包埋和制片：脫水用梯度乙醇（由低到高）充分脫水、對組織要*浸蠟、切片時刀片要干凈和鋒利。否則，容易裂片和脫片等。3、脫蠟和水化：這是為了后面的抗體等試劑能夠充分與組織中抗原等結合反應。脫蠟可以先60度20min,然后立即二甲苯1-3分別10min,但當天制好的切片可以60度3-4h.水化用梯度乙醇（由高到低）。若脫蠟和水化不全易出現局灶性反