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標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備一般過(guò)程2025/02/24: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備是一個(gè)關(guān)鍵的過(guò)程，確保其質(zhì)量和可追溯性。下面是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備一般過(guò)程：1、確定目標(biāo)物質(zhì)和純度要求：確定所需的目標(biāo)物質(zhì)以及其純度要求。這可能涉及從商業(yè)供應(yīng)商購(gòu)買純品，從自然來(lái)源提取物質(zhì)，或者通過(guò)化學(xué)合成等方式制備目標(biāo)物質(zhì)。2、基于定量分析方法：建立適當(dāng)?shù)亩糠治龇椒ǎ源_保目標(biāo)物質(zhì)的含量可以準(zhǔn)確地測(cè)量。這通常涉及使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)和驗(yàn)證。3、制備溶液或混合物：根據(jù)定量分析方法，準(zhǔn)備目標(biāo)物質(zhì)的溶液或混合物。這可能包括將目標(biāo)物質(zhì)溶解于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，并按照特定的配比混合?、純

qPCR擴(kuò)增過(guò)程與CT值有關(guān)要素2025/02/17: Ct值是qPCR擴(kuò)增過(guò)程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)的所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)（CycleThreshold）。CT值與有關(guān)要素：閾值循環(huán)數(shù)Thresholdcycle(Ct)也寫作Cq值，熒光信號(hào)大于熒光閾值時(shí)PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個(gè)循環(huán)的熒光值設(shè)為基線（baseline），是由于測(cè)量的偶然誤差引起的。閾值（threshold）一般是基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。在實(shí)際操作中也可以手動(dòng)調(diào)節(jié)。高于閾值的熒光信號(hào)被認(rèn)為是真實(shí)的信號(hào)，用于定義Ct值。Ct會(huì)受到閾值的影響，每次試驗(yàn)由

植物標(biāo)準(zhǔn)品如何管理？2025/02/10: 植物標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的管理:1.規(guī)范記錄：建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)臺(tái)帳，具體包括名稱、編號(hào)或批號(hào)、濃度及不確定度，定值日期、有效期、定值單位以及入賬日期等，并定期更新臺(tái)賬，明確責(zé)任主體，以便做到可以追本溯源；領(lǐng)用時(shí)，記錄好領(lǐng)用時(shí)的名稱、數(shù)量、時(shí)間、領(lǐng)用人、發(fā)放人等必要的信息；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)在有效期內(nèi)使用，因此定期檢查標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的有效期是必要的，對(duì)于超過(guò)期限的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要填寫銷毀登記表，清晰的記錄下要銷毀的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)名稱、數(shù)量、銷毀方式以及批準(zhǔn)人；建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檔案。2.定期核查：對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的種類、級(jí)別、介質(zhì)、濃度含量、

PCR反應(yīng)設(shè)計(jì)引物需考慮問(wèn)題2025/02/05: PCR反應(yīng)設(shè)計(jì)引物需考慮問(wèn)題：1．酶切位點(diǎn)兩個(gè)酶切位點(diǎn)應(yīng)是載體上的，所連接片斷上沒(méi)有這兩個(gè)位點(diǎn)，且距離不能太近，否則往往導(dǎo)致兩個(gè)酶都切不好。因此，兩個(gè)酶切位點(diǎn)要緊挨在一起，只能切一個(gè)，除非恰好是與上面兩個(gè)酶在一起的酶切位點(diǎn)，最好隔四個(gè)核苷酸。且不能有堿基的交叉，比如AGATCTTAAG，這樣的位點(diǎn)比較難切。2．酶的選擇最好使用雙酶切效率高的，但兩個(gè)酶切點(diǎn)最好不要是同尾酶（切下來(lái)的殘基不要互補(bǔ)），否則效果相當(dāng)于單酶切，最好使用具有共同buffer，且較常用的酶（如hind3，bamh1，ecor1

防細(xì)胞污染的操作小技巧匯集2025/01/20: 細(xì)菌污染尤為常見(jiàn)，一旦操作稍有不當(dāng)，就會(huì)引起細(xì)胞污染，細(xì)菌污染后顯微鏡下觀察呈現(xiàn)有黑色細(xì)條沙狀，當(dāng)然，根據(jù)感染的細(xì)菌不同，所呈現(xiàn)的狀態(tài)也不盡相同。防止污染這件事，真的沒(méi)有那么簡(jiǎn)單，給大家簡(jiǎn)單講述一下防污染的操作小技巧：1、操作時(shí)，試劑不用盡量及時(shí)蓋上蓋子，每開(kāi)一個(gè)試劑要用酒精燈消毒。2、從培養(yǎng)箱取放細(xì)胞前，用酒精清潔雙手，盡量縮短開(kāi)門時(shí)間和減少開(kāi)門次數(shù)。3、培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過(guò)多乙醇蒸氣。4、使用移液槍時(shí)，將容器傾斜以便于移液，切勿將槍

ELISA競(jìng)爭(zhēng)法計(jì)算方法2025/01/13: 在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中，陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競(jìng)爭(zhēng)抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對(duì)照的吸光度在1.0-1.5之間，此時(shí)反應(yīng)為敏感。競(jìng)爭(zhēng)法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽(yáng)性反應(yīng)與陰性對(duì)照的顯色差異，一般均用比色計(jì)測(cè)定，讀出S、P和N的吸光值。計(jì)算方法主要也有兩種，即陽(yáng)性判定值法和抑制率法。陽(yáng)性判定值法:與間接法和夾心法中的陽(yáng)性判定值法基本相同，但在計(jì)算公式中引入陽(yáng)性對(duì)照A值，現(xiàn)舉某種檢測(cè)抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對(duì)照為不含抗HBc的復(fù)

ELISA試驗(yàn)包被的方式2025/01/06: 將抗原或抗體固定在過(guò)程稱為包被(coating)。換言之，包被即是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。蛋白質(zhì)與(C8H8)n固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯C2H4等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的

多克隆抗體的制備2024/12/24: 多克隆抗體的制備：1、免疫方法：對(duì)多克隆抗體，免疫方法一般有皮下或肌肉免疫法、皮內(nèi)免疫法、淋巴結(jié)免疫法和混合法等。一般來(lái)說(shuō)，皮下或肌肉免疫法產(chǎn)生的抗體比較多；皮內(nèi)免疫法所需的抗原量少，在抗原寶貴時(shí)特別適用，但與之相對(duì)的，它產(chǎn)生的抗體量也不多?；旌厦庖叻ǖ膬?yōu)點(diǎn)是抗原用量小，產(chǎn)生抗體速度快。2、多克隆抗體的制備：將抗原免疫動(dòng)物（常用的動(dòng)物為兔、羊、狗等），分離出抗血清并純化抗體。多克隆抗體的均一性較差，其特異性相對(duì)較低，因此，多克隆抗體在農(nóng)藥殘留速測(cè)技術(shù)中的應(yīng)用受到一定的限制。但近年來(lái)有學(xué)者恰恰利用

細(xì)胞工程技術(shù)主要內(nèi)容包括什么？2024/12/17: 1、動(dòng)植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)該技術(shù)顯著的價(jià)值在于優(yōu)良植物的快速繁育與代謝產(chǎn)物的大量制備方面。動(dòng)植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)可分為三個(gè)層次上的培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)和器官培養(yǎng)。2、細(xì)胞融合采用自然或人工的方法使兩個(gè)或幾個(gè)不同細(xì)胞（或原生質(zhì)體）融合為一個(gè)細(xì)胞，用于生產(chǎn)新的物種或品系（植物上用得多，動(dòng)物上用得少）及產(chǎn)生單克隆抗體。其中單克隆抗體技術(shù)能利用克隆化的雜交瘤細(xì)胞分泌高度純一的單克隆抗體，具有很高的實(shí)用價(jià)值，已經(jīng)在診斷和治療病癥方面做出了很大的貢獻(xiàn)。3、染色體工程染色體工程是按照人們的需要來(lái)添加、消減或替

PCR反應(yīng)條件溫度與時(shí)間選擇技巧2024/12/09: PCR反應(yīng)條件的選擇技巧主要體現(xiàn)在溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)上，溫度過(guò)高，延伸時(shí)間不夠都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有很大的影響。PCR反應(yīng)條件三要素為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時(shí)間的設(shè)置基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因(長(zhǎng)度為100～300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度

細(xì)胞老化的征兆2024/12/02: 細(xì)胞老化的征兆1、細(xì)胞周期阻滯：長(zhǎng)期的細(xì)胞周期阻滯是老化細(xì)胞的基本特征，也是體外鑒定細(xì)胞老化的指標(biāo)。為了檢查細(xì)胞是否躍出了細(xì)胞周期，人們通常檢測(cè)增殖指示分子Ki-67的表達(dá)豐度；或者通過(guò)將與胸腺嘧啶相似的溴脫氧尿mi啶（Bromodeoxyuridine，BrdU）摻入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，觀察是否有新的DNA合成。細(xì)胞老化主要表現(xiàn)為G1期阻滯，個(gè)別情況下也可伴隨G2/M期周期阻滯，或直接由G2/M期阻滯誘發(fā)形成。2、細(xì)胞形態(tài)改變:雖然由于細(xì)胞周期的中斷和DNA復(fù)制的停止，老化細(xì)胞內(nèi)的DNA含量與正常

科研實(shí)驗(yàn)對(duì)抗體需求指導(dǎo)2024/11/26: 科研實(shí)驗(yàn)工作離不開(kāi)抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那么這幾種實(shí)驗(yàn)技術(shù)都需要什么樣的抗體呢？1.WBWB的蛋白經(jīng)過(guò)加熱變性之后都變成線性的結(jié)構(gòu)。因此*好的抗體是采用非常特異序列的人工合成多肽的方法來(lái)做實(shí)驗(yàn)，結(jié)果也非常特異。2.IP/CHIP我們用抗體去結(jié)合生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此IP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體來(lái)做，也可以用純化的重組蛋白的抗體。最好不要用人工合成多肽制作的抗體，因?yàn)檫@種抗體識(shí)別的位點(diǎn)可能被深深地藏在了蛋白的內(nèi)心深處。CHIP和IP沒(méi)有太大的

ELISA試驗(yàn)洗滌參數(shù)與次數(shù)介紹2024/11/18: ELISA即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，是一類常用的免疫酶技術(shù)。主要方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，然后利用酶標(biāo)記（偶聯(lián)）的抗體或抗原與之孵育，加入顯色劑顯色，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定待測(cè)物顏色與標(biāo)準(zhǔn)物顏色的差異，繪制出酶活曲線得出待測(cè)物濃度。優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào)，從而增加分析的信噪比。1、洗滌參數(shù)主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過(guò)高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌

干血斑DNA快速提取試劑盒實(shí)驗(yàn)反應(yīng)條件優(yōu)化2024/11/04: 干血斑DNA快速提取試劑盒實(shí)驗(yàn)反應(yīng)條件優(yōu)化：1、變性溫度和時(shí)間：保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C,30~60s，再?gòu)?fù)雜的DNA分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害。2、復(fù)性溫度和時(shí)間:PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過(guò)程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。3、延伸溫度和時(shí)間:一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí)，

ELISA試劑盒樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備2024/10/28: 樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。（1）血清室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。（2）血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。（3）尿液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收

細(xì)胞冷凍保存方法?步驟與注意事項(xiàng)2024/10/21: 冷凍保存方法：1、傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘----20℃30分鐘----80℃16～18小時(shí)(或隔夜)---液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止胞內(nèi)冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。2、程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。3、步驟：（1）冷凍前24-48小時(shí)

ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)類型特點(diǎn)2024/10/14: ELISA實(shí)驗(yàn)就是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）是將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結(jié)合以及抗體或者抗原上標(biāo)記的酶催化特定底物發(fā)生顯色反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物檢測(cè)的免疫分析方法，可測(cè)至皮摩爾（pmol）級(jí)別。ELISA常見(jiàn)類型：直接法：將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結(jié)果。特點(diǎn)：適用于檢測(cè)小分子抗原，優(yōu)勢(shì)：實(shí)驗(yàn)步驟少，檢測(cè)速度快，無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)，

細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇過(guò)程2024/10/09: 細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇原理：在不加條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護(hù)劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結(jié)條件下，能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)速度要快，使之迅速通過(guò)細(xì)胞易受損的－5～0℃，細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，活力受損不大。目前常用的保護(hù)劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞。一、凍存

?ELISA檢測(cè)試劑盒比色解析2024/09/29: ELISA的比色測(cè)定由酶標(biāo)儀進(jìn)行，有的同行可能會(huì)認(rèn)為，既然由酶標(biāo)儀進(jìn)行，那么此時(shí)便可以萬(wàn)事大吉了，其實(shí)不然，因?yàn)楫?dāng)代較為先進(jìn)的酶標(biāo)儀器儀表，均有較多的功能，使用不當(dāng)，會(huì)得到令人難以理解的結(jié)果。如使用酶標(biāo)儀比色測(cè)定后，有許多陰性測(cè)定孔的吸光度值為負(fù)數(shù)或測(cè)定假陽(yáng)性率大大增加等等。這主要是沒(méi)有正確地理解和使用酶標(biāo)儀所致。至于如何正確理解和使用酶標(biāo)儀詳見(jiàn)后面有關(guān)章節(jié)。此處，只是強(qiáng)調(diào)下面兩點(diǎn)：1、比色測(cè)定時(shí)，一定要注意酶標(biāo)儀的波長(zhǎng)是否已調(diào)至合適或所用濾光片是否正確。由于有的臨床實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行ELISA測(cè)定時(shí)

PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整過(guò)程2024/09/24: PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整過(guò)程:一旦確定反應(yīng)被抑制或效率較低，則可采取一些步驟將效率值重新調(diào)整到理想范圍內(nèi)。1、對(duì)于抑制作用，可去除模板濃度最高的反應(yīng)孔并重新分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果效率重新回到110%以下，則分析良好。2、另一種解決方案是重新純化模板。切記應(yīng)延長(zhǎng)干燥時(shí)間，以去除乙醇沉淀過(guò)程中的乙醇，或采用另外的柱上洗滌液將離液鹽從硅膠純化物中去除。3、通過(guò)分析優(yōu)化可解決效率低下的問(wèn)題。此過(guò)程有時(shí)相對(duì)簡(jiǎn)單，但在某些情況下，隨著分析復(fù)雜度的提高，優(yōu)化過(guò)程可能十分耗時(shí)費(fèi)力。4、擴(kuò)增單個(gè)產(chǎn)物時(shí)，將鎂的濃

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