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PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整過程2024/09/24: PCR反應(yīng)被抑制或效率較低調(diào)整過程:一旦確定反應(yīng)被抑制或效率較低，則可采取一些步驟將效率值重新調(diào)整到理想范圍內(nèi)。1、對于抑制作用，可去除模板濃度最高的反應(yīng)孔并重新分析標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果效率重新回到110%以下，則分析良好。2、另一種解決方案是重新純化模板。切記應(yīng)延長干燥時(shí)間，以去除乙醇沉淀過程中的乙醇，或采用另外的柱上洗滌液將離液鹽從硅膠純化物中去除。3、通過分析優(yōu)化可解決效率低下的問題。此過程有時(shí)相對簡單，但在某些情況下，隨著分析復(fù)雜度的提高，優(yōu)化過程可能十分耗時(shí)費(fèi)力。4、擴(kuò)增單個(gè)產(chǎn)物時(shí)，將鎂的濃

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作2024/09/18: 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：1、進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)

PCR反應(yīng)總RNA提取操作流程2024/09/09: PCR反應(yīng)總RNA提取操作流程：1、A組織樣本：迅速將新鮮的組織切成合適的大小，在液氮中充分研磨后加裂解液裂解，或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1mlTrizol。2、B全血樣品：加入3-5倍體積的紅細(xì)胞裂解液到血樣中，室溫孵育10min，室溫3500rpm離心6min。棄上清，原每2-3ml全血樣品加1mLTrizol。3、C細(xì)胞樣品：懸浮液中生長的細(xì)胞，通過離心收集細(xì)胞后，每1×105?106細(xì)胞加入1mLTrizol，移液器吹打混勻，直接裂解或-80℃儲存一個(gè)月。貼壁

合適細(xì)胞株常見鑒定方法2024/09/02: 當(dāng)獲得多個(gè)雜交瘤細(xì)胞株時(shí)，要了解哪一株是適用的，則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有：1、Ig類型測定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行測定，確定其Ig類型或Ig亞類型別。2、特異性測定把與相應(yīng)抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免疫學(xué)檢測，鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應(yīng)用的可靠性。3、抗體效價(jià)測定效價(jià)以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價(jià)也越高。在凝集反應(yīng)中，腹腔積液效價(jià)可達(dá)5萬以上；在ELISA中，腹腔積液效價(jià)可達(dá)100萬以上。

鑒定適合細(xì)胞株的常見方法2024/08/26: 鑒定適合細(xì)胞株的常見方法：當(dāng)獲得多個(gè)雜交瘤細(xì)胞株時(shí)，要了解哪一株是適用的，則一定要通過各種鑒定。分析常見的方法有：1、Ig類型測定通常以免抗小鼠Ig類及亞類抗體與培養(yǎng)液中單克隆抗體按雙向瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行測定，確定其Ig類型或Ig亞類型別。2、特異性測定把與相應(yīng)抗原有關(guān)的物質(zhì)同McAb進(jìn)行多種免疫學(xué)檢測，鑒定McAb的特異性。這直接關(guān)系到McAb應(yīng)用的可靠性。3、抗體效價(jià)測定效價(jià)以腹腔積液或培養(yǎng)液的稀釋度表示，稀釋度越高，則抗體效價(jià)也越高。在凝集反應(yīng)中，腹腔積液效價(jià)可達(dá)5萬以上；在ELISA中，腹腔

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）常見樣本處理2024/08/19: ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著*的作用。1、血漿用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。常用的抗凝劑為EDTA和ca.(C12H16NS2Na3)20等，檢測時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。2、血清血清是于ELISA檢測的一類樣本，處

抗體的結(jié)構(gòu)詳述2024/08/12: 抗體的結(jié)構(gòu):抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個(gè)輕鏈（L）和兩個(gè)重鏈（H）的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?，有κ（kappa）和λ（Lambda）兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ（gamma）鏈和μ（mu）鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示。兩者

廣泛應(yīng)用的特異性RNA酶抑制劑概述2024/08/05: 下面介紹３種廣泛應(yīng)用的特異性RNA酶抑制劑。1、RNA酶的蛋白質(zhì)抑制劑是從人胎盤分離的一種蛋白質(zhì)可與多種RNA酶緊密結(jié)合（KI≈3x1010）形成非共價(jià)結(jié)合的等摩爾復(fù)合物，使RNA酶失活。此蛋白質(zhì)體內(nèi)可能是血管生成素的抑制劑，血管生成素是氨基酸序列和推測的三級結(jié)構(gòu)與胰RNA酶類似的一種血管生成因子，幾個(gè)廠家以不同的商品名出售這種抑制劑，該蛋白質(zhì)應(yīng)置于含5mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）的50％甘油中，貯存于－20℃。抑制劑制品凍融數(shù)次后或放置在氧化條件下即應(yīng)棄之不用，因?yàn)樯鲜鎏幚頃?huì)使蛋白質(zhì)變性從

CD44大鼠白細(xì)胞分化抗原44ELISA試劑盒特性匯總2024/07/30: CD44大鼠白細(xì)胞分化抗原44ELISA試劑盒特性匯總：靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價(jià)其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。精密度：ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時(shí)考察線性范圍。準(zhǔn)確度：通過添加回收實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評價(jià)。簡便性：指在不影響試劑的前三項(xiàng)指標(biāo)的前題下，實(shí)驗(yàn)和測定步驟越少越好，在定性實(shí)驗(yàn)中結(jié)果

大鼠原代細(xì)胞（Primary cells）分離培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟2024/07/22: 原代細(xì)胞（Primarycells）是指直接從機(jī)體取出的組織或細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行培養(yǎng)的細(xì)胞。組織主要指組織器官、外周血及胚胎等。由于原代細(xì)胞生長緩慢，繁殖一定的代數(shù)停止生長（一般10代以內(nèi)）。實(shí)驗(yàn)步驟：1.取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。2.在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。3.將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)

多克隆抗體和單克隆抗體的用途簡述2024/07/15: 多克隆抗體和單克隆抗體的用途：1、定義多克隆抗體和單克隆抗體有用性的兩個(gè)關(guān)鍵特征涉及它們各自對抗原的特異性和靈敏度。2、抗體的特異性是由其結(jié)合域和目標(biāo)抗原之間的相對親和力決定的，而其他分子是存在的。對這種特異性的利用對免疫學(xué)研究人員和臨床醫(yī)生來說是至關(guān)重要的，因?yàn)樵S多應(yīng)用都是利用多克隆和/或單克隆抗體來專門檢測目標(biāo)分子。結(jié)合抗原特異性，抗體的靈敏度是一個(gè)重要的參數(shù)，決定了它在實(shí)驗(yàn)室的實(shí)用性。3、高靈敏度的抗體非常適用于診斷應(yīng)用，如免疫沉淀、WestBlot和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），因?yàn)樗?

PCR檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)各種溫度設(shè)置2024/07/08: PCR又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，PCR的過程可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)，是能將微量的DNA大幅增加。在PCR自動(dòng)熱循環(huán)中，最關(guān)鍵的因素是變性與退火的溫度。其變性、退火、延伸的條件是：94℃60s,37℃60s,72℃120s，共25～30個(gè)循環(huán)，擴(kuò)增片段500bp。在這里，每一步的時(shí)間應(yīng)從反應(yīng)混合液達(dá)到所要求的溫度后開始計(jì)算。在自動(dòng)熱循環(huán)儀內(nèi)由混合液原溫度變至所要求溫度的時(shí)間需要30～60s，這一遲滯時(shí)間的長短取決于幾個(gè)因素，包括反應(yīng)管類型、壁厚、反應(yīng)混合液體積、熱源(水浴或加

實(shí)驗(yàn)室生化試劑盒選購參照要素2024/07/01: 通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動(dòng)生化分析儀和小型自動(dòng)生化分析儀，使用方便，缺點(diǎn)是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點(diǎn)。此外還有多項(xiàng)同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑等。其次，在實(shí)驗(yàn)室，可參照要素選購生化試劑盒。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動(dòng)時(shí)的吸光度(A1)和約5分鐘后的吸光度(A2)

大鼠elisa試劑盒?雙抗體夾心法操作方法2024/06/24: 大鼠elisa試劑盒雙抗體夾心法操作方法：1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。3.加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí)

ELISA試驗(yàn)移液技術(shù)注意點(diǎn)2024/06/24: 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一種基于多孔板的技術(shù)，用于確定生物樣品中的抗體、抗原或其他蛋白質(zhì)的濃度，使用發(fā)色、熒光或發(fā)光的讀數(shù)。ELISA實(shí)驗(yàn)試劑和樣品處理不當(dāng)或儲存不正確會(huì)影響下游分析，因?yàn)椴煌木彌_劑和試劑會(huì)有不同的儲存要求。例如，有些必須儲存在冰箱里，有些在室溫下，有些用感光罩（如鋁箔）。如果有計(jì)劃在未來的實(shí)驗(yàn)中使用相同的樣品，那么應(yīng)該把它們放入等分試樣中，需要時(shí)再取出來。這將避免多次冷凍/解凍循環(huán)，保持準(zhǔn)確的結(jié)果。當(dāng)樣品準(zhǔn)備使用時(shí)，應(yīng)在冰上解凍（或根據(jù)方案）。移液技術(shù)注意要點(diǎn)如下：1

PCR反應(yīng)條件分析2024/06/18: PCR反應(yīng)體系由反應(yīng)緩沖液（10×PCRBuffer）、脫氧核苷三磷酸底物（dNTPmix）、耐熱DNA聚合酶（Taq酶）、寡聚核苷酸引物（Primer1，Primer2）、靶序列（DNA模板）五部分組成。各個(gè)組份都能影響PCR結(jié)果的好壞。PCR反應(yīng)需要一定的條件才能完成，這些條件主要有以下方面：一、緩沖液任何一個(gè)生化反應(yīng)都必須在一定的緩沖體系中進(jìn)行，緩沖體系除了提供一定的pH緩沖能力外，還有一些有助于反應(yīng)進(jìn)行的成分。PCR反應(yīng)緩沖液通常采用10mmol/LTris-HCl（pH8.3-9.0，

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)一般操作過程2024/06/12: 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)一般操作過程：1、進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。2、操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑

抗原抗體反應(yīng)的特性是什么2024/06/03: 抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行?？乖贵w反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測中多以血清為試驗(yàn)材料，故將體外抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)也稱作血清學(xué)反應(yīng)(serologicalreaction)。該反應(yīng)既可用已知的抗原檢測未知的抗體，這是臨床上常用的血清學(xué)診斷方法；也可用已知的抗體檢測未知的抗原，如微生物及其

ELISA試劑盒結(jié)果的判定與報(bào)告2024/05/27: ELISA試劑盒結(jié)果的判定與報(bào)告：1、結(jié)果的判定嚴(yán)格依據(jù)試劑盒提供的陽性判定值（CO）進(jìn)行結(jié)果判定。廠商提供試劑的同時(shí)，說明書上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗(yàn)及統(tǒng)計(jì)研究的基礎(chǔ)上，不應(yīng)隨意更改。定量測定需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算結(jié)果。2、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下ELISA結(jié)果報(bào)告方式為“陰性”或“陽性”，在二者之間有一條明確的分界線，也就是所謂的陽性判定值即CO值，對于樣本的吸光度值（A）高于CO值就判斷為陽性，相反則判斷為陰性，然而在實(shí)際工作中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)樣本A值位于CO值附近的人群，即E

實(shí)驗(yàn)選擇合適抗體需要考慮的因素2024/05/20: 抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：1.實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB/IHC/ICC/ELISA分析等，如果抗體說明

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